home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ Shareware Overload Trio 2 / Shareware Overload Trio Volume 2 (Chestnut CD-ROM).ISO / dir26 / med9407a.zip / M9470171.TXT < prev   
Text File  |  1994-07-02  |  3KB  |  48 lines
  1.        Document 0171
  2.  DOCN  M9470171
  3.  TI    Engineering of the human-immunodeficiency-virus-type-1 (HIV-1) reverse
  4.        transcriptase gene to prevent dimerization of the expressed chimaeric
  5.        protein: purification and characterization of a monomeric HIV-1 reverse
  6.        transcriptase.
  7.  DT    9409
  8.  AU    Sharma SK; Basu A; Fan N; Evans DB; Upjohn Laboratories, Kalamazoo, MI
  9.        49001.
  10.  SO    Biotechnol Appl Biochem. 1994 Apr;19 ( Pt 2):155-67. Unique Identifier :
  11.        AIDSLINE MED/94250350
  12.  AB    We report here a human-immunodeficiency-virus-type-1 (HIV-1) recombinant
  13.        reverse transcriptase (RT) engineered to contain a 26-amino-acid linker
  14.        insertion from the tether domain of feline leukaemia virus (FLV) RT. The
  15.        chimaeric protein was expressed in Escherichia coli and migrated on
  16.        SDS/PAGE as a 68 kDa band. A monomeric form of the chimaeric HIV-1 RT
  17.        has been prepared by the coordinated applications of
  18.        immobilized-metal-affinity chromatography and gel filtration on Superose
  19.        12 columns. The monomeric nature of this chimaeric HIV-I RT was further
  20.        characterized by cross-linking studies using disuccinimidyl suberate.
  21.        The RNA-dependent DNA polymerase activity of the monomeric chimaeric
  22.        HIV-1 RT was 35% that of the heterodimeric (p66/p51) HIV-1 RT. These
  23.        results support our recent studies on the monomeric polymerase domain
  24.        (p51 RT) which exhibited an RNA-dependent DNA polymerase activity equal
  25.        to 33% of that of the p66/p51 heterodimeric HIV-1 RT (Evans, Kezdy,
  26.        Tarpley and Sharma [1993] Biotechnol. Appl. Biochem. 17, 91-102). The
  27.        inability of the monomeric chimaeric HIV-1 RT to display polymerase
  28.        activity like that of the heterodimeric HIV-1 RT is attributed to a
  29.        decrease in the processive rate of DNA synthesis (75%) and DNA binding
  30.        (65%). However, the monomeric chimaeric HIV-1 RT (p68) exhibited RNAase
  31.        H activity like that of the heterodimeric form (p66/p51) of HIV-1 RT.
  32.        These results suggest that the linker insertion from FLV RT does not
  33.        interfere with the RNAase H activity associated with the monomeric HIV-1
  34.        RT.
  35.  DE    Amino Acid Sequence  Chimeric Proteins/CHEMISTRY/GENETICS/ISOLATION &
  36.        PURIF  Chromatography, Affinity  Chromatography, Gel  Cross-Linking
  37.        Reagents  DNA Polymerases/METABOLISM  Electrophoresis, Polyacrylamide
  38.        Gel  Escherichia coli/GENETICS  Human  HIV-1/GENETICS  Leukemia Virus,
  39.        Feline/CHEMISTRY/ENZYMOLOGY  Molecular Sequence Data  Molecular Weight
  40.        Polymers  Protein Engineering  Reverse
  41.        Transcriptase/CHEMISTRY/*GENETICS/ISOLATION & PURIF  Ribonuclease H,
  42.        Calf Thymus/METABOLISM  Succinimides/CHEMISTRY  Support, U.S. Gov't,
  43.        P.H.S.  JOURNAL ARTICLE
  44.  
  45.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  46.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  47.  
  48.